Javascript ຖືກປິດໃຊ້ງານຢູ່ໃນຕົວທ່ອງເວັບຂອງທ່ານ.ເມື່ອ javascript ຖືກປິດໃຊ້ງານ, ບາງຫນ້າທີ່ຂອງເວັບໄຊທ໌ນີ້ຈະບໍ່ເຮັດວຽກ.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * ຜູ້ຂຽນເຫຼົ່ານີ້ມີຄວາມເຂົ້າໃຈບາງຢ່າງກ່ຽວກັບວຽກງານນີ້ເທົ່າທຽມກັນ ພື້ນຫລັງການປະກອບສ່ວນ: ອາຊິດ Hyaluronic (HA) ແມ່ນໂພລີຊາກຄາໄຣທີ່ເກີດຂື້ນຕາມທໍາມະຊາດທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດສານເຕີມເຕັມຜິວຫນັງເພື່ອຈຸດປະສົງດ້ານຄວາມງາມ.ເນື່ອງຈາກມັນມີເຄິ່ງຊີວິດຂອງຫຼາຍມື້ໃນເນື້ອເຍື່ອຂອງມະນຸດ, ທາດເຕີມເຕັມຜິວໜັງທີ່ອີງໃສ່ HA ໄດ້ຖືກດັດແປງທາງເຄມີເພື່ອຍືດອາຍຸຂອງມັນຢູ່ໃນຮ່າງກາຍ.ການດັດແປງທົ່ວໄປທີ່ສຸດໃນການຕື່ມຂໍ້ມູນໃສ່ HA ທາງດ້ານການຄ້າແມ່ນການນໍາໃຊ້ 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) ເປັນຕົວເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມເພື່ອເຊື່ອມຕໍ່ຕ່ອງໂສ້ HA.BDDE ທີ່ຕົກຄ້າງ ຫຼືບໍ່ມີປະຕິກິລິຍາແມ່ນຖືວ່າບໍ່ມີສານພິດຢູ່ທີ່ <2 ສ່ວນຕໍ່ລ້ານ (ppm);ດັ່ງນັ້ນ, BDDE ທີ່ຕົກຄ້າງຢູ່ໃນສານເຕີມເຕັມຜິວໜັງສຸດທ້າຍຕ້ອງຖືກຄິດໄລ່ເປັນປະລິມານເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມປອດໄພຂອງຄົນເຈັບ.ວັດສະດຸ ແລະວິທີການ: ການສຶກສານີ້ອະທິບາຍເຖິງການຊອກຄົ້ນຫາ ແລະລັກສະນະຂອງຜົນກຳໄລຂອງປະຕິກິລິຍາການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມລະຫວ່າງ BDDE ແລະ HA ພາຍໃຕ້ສະພາບທີ່ເປັນດ່າງ ໂດຍການລວມເອົາທາດໂຄຣມາໂຕຼີຂອງແຫຼວ ແລະ ມະຫາຊົນ (LC-MS).ຜົນໄດ້ຮັບ: ຫຼັງຈາກການວິເຄາະທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ມັນໄດ້ພົບເຫັນວ່າສະພາບທີ່ເປັນດ່າງແລະອຸນຫະພູມສູງທີ່ໃຊ້ໃນການຂ້າເຊື້ອ hydrogel HA-BDDE ໄດ້ສົ່ງເສີມການສ້າງຕັ້ງຂອງຜະລິດຕະພັນໃຫມ່ນີ້, ທາດປະສົມ "propylene glycol-like".ການວິເຄາະ LC-MS ໄດ້ຢືນຢັນວ່າຜະລິດຕະພັນມີສ່ວນປະສົມມີມວນ monoisotopic ດຽວກັນກັບ BDDE, ເວລາເກັບຮັກສາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (tR), ແລະການດູດຊຶມ UV ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (λ=200 nm).ບໍ່ເຫມືອນກັບ BDDE, ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໃນການວິເຄາະ LC-MS ວ່າພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການວັດແທກດຽວກັນ, ຜະລິດຕະພັນນີ້ມີອັດຕາການກວດພົບທີ່ສູງກວ່າຢູ່ທີ່ 200 nm.ສະຫຼຸບ: ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າບໍ່ມີ epoxide ໃນໂຄງສ້າງຂອງສານປະສົມໃຫມ່ນີ້.ການສົນທະນາແມ່ນເປີດເພື່ອປະເມີນຄວາມສ່ຽງຂອງຜະລິດຕະພັນໃຫມ່ນີ້ທີ່ພົບເຫັນໃນການຜະລິດ HA-BDDE hydrogel (HA dermal filler) ສໍາລັບຈຸດປະສົງທາງການຄ້າ.ຄໍາສໍາຄັນ: ອາຊິດ hyaluronic, HA dermal filler, ອາຊິດ hyaluronic ຂ້າມເຊື່ອມຕໍ່, BDDE, ການວິເຄາະ LC-MS, BDDE ຜະລິດຕະພັນ.
Fillers ໂດຍອີງໃສ່ອາຊິດ hyaluronic (HA) ແມ່ນສານເຕີມເຕັມຜິວຫນັງທົ່ວໄປແລະເປັນທີ່ນິຍົມທີ່ສຸດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງເຄື່ອງສໍາອາງ.1 ສານເຕີມເຕັມຜິວໜັງນີ້ແມ່ນ hydrogel, ປົກກະຕິແລ້ວປະກອບດ້ວຍນ້ໍາ > 95% ແລະ 0.5-3% HA, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ພວກເຂົາມີໂຄງສ້າງຄ້າຍຄືເຈນ.2 HA ແມ່ນ polysaccharide ແລະອົງປະກອບຕົ້ນຕໍຂອງ matrix extracellular ຂອງກະດູກສັນຫຼັງ.ຫນຶ່ງໃນສ່ວນປະກອບ.ມັນປະກອບດ້ວຍ (1,4)-glucuronic acid-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) ຫນ່ວຍ disaccharide ຊໍ້າຄືນທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ໂດຍພັນທະບັດ glycosidic.ຮູບແບບ disaccharide ນີ້ແມ່ນຄືກັນໃນທຸກສິ່ງມີຊີວິດ.ເມື່ອປຽບທຽບກັບສານເຕີມເຕັມທີ່ມີທາດໂປຼຕີນ (ເຊັ່ນ collagen), ຄຸນສົມບັດນີ້ເຮັດໃຫ້ HA ເປັນໂມເລກຸນທີ່ມີຊີວະພາບສູງ.fillers ເຫຼົ່ານີ້ສາມາດສະແດງຄວາມສະເພາະຂອງລໍາດັບອາຊິດ amino ທີ່ອາດຈະໄດ້ຮັບການຮັບຮູ້ໂດຍລະບົບພູມຕ້ານທານຂອງຄົນເຈັບ.
ເມື່ອຖືກນໍາໃຊ້ເປັນສານເຕີມເຕັມຜິວຫນັງ, ຂໍ້ຈໍາກັດຕົ້ນຕໍຂອງ HA ແມ່ນການຫັນຫນ້າຢ່າງໄວວາຂອງມັນຢູ່ໃນເນື້ອເຍື່ອເນື່ອງຈາກມີຄອບຄົວສະເພາະຂອງເອນໄຊທີ່ເອີ້ນວ່າ hyaluronidases.ມາຮອດປະຈຸ, ການປ່ຽນແປງທາງເຄມີຈໍານວນຫນຶ່ງໃນໂຄງສ້າງ HA ໄດ້ຖືກອະທິບາຍເພື່ອເພີ່ມເຄິ່ງຊີວິດຂອງ HA ໃນເນື້ອເຍື່ອ.3 ສ່ວນໃຫຍ່ຂອງການດັດແປງເຫຼົ່ານີ້ພະຍາຍາມຫຼຸດຜ່ອນການເຂົ້າເຖິງຂອງ hyaluronidase ກັບໂພລີເມີເຊກຄາໄບໂພລີເມີໂດຍສາຍຕ່ອງໂສ້ HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມ.ດັ່ງນັ້ນ, ເນື່ອງຈາກການສ້າງຂົວແລະພັນທະບັດ covalent intermolecular ລະຫວ່າງໂຄງສ້າງ HA ແລະຕົວເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມ, HA hydrogel ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມຜະລິດຜະລິດຕະພັນການເຊື່ອມໂຊມຂອງເອນໄຊຫຼາຍກ່ວາ HA ທໍາມະຊາດ.4-6
ມາຮອດປະຈຸ, ສານເຄມີ crosslinking ຕົວແທນທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດ crosslinked HA ປະກອບມີ methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) ແລະ poly (ethylene glycol) diglycidyl ether.10 ,11 BDDE ປະຈຸບັນແມ່ນຕົວແທນ crosslinking ທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດ.ເຖິງແມ່ນວ່າປະເພດຂອງ hydrogels ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຮັບການພິສູດວ່າມີຄວາມປອດໄພສໍາລັບທົດສະວັດ, ຕົວແທນ crosslinking ທີ່ໃຊ້ແມ່ນ reactive reactive ທີ່ອາດຈະເປັນ cytotoxic ແລະ, ໃນບາງກໍລະນີ, mutagenic.12 ດັ່ງນັ້ນ, ເນື້ອໃນທີ່ຕົກຄ້າງຂອງພວກມັນຢູ່ໃນ hydrogel ສຸດທ້າຍຕ້ອງສູງ.BDDE ຖືວ່າປອດໄພເມື່ອຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງສານຕົກຄ້າງໜ້ອຍກວ່າ 2 ສ່ວນຕໍ່ລ້ານ (ppm).4
ມີຫຼາຍວິທີໃນການກວດສອບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ BDDE ຕ່ໍາ, ລະດັບການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມແລະຕໍາແຫນ່ງທົດແທນໃນ HA hydrogels, ເຊັ່ນ: chromatography ອາຍແກັສ, chromatography ການຍົກເວັ້ນຂະຫນາດບວກໃສ່ກັບ mass spectrometry (MS), ວິທີການວັດແທກ fluorescence ສະນະແມ່ເຫຼັກນິວເຄລຍ (NMR) ແລະ. Diode array ສົມທົບການ chromatography ແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ (HPLC).13-17 ການສຶກສານີ້ອະທິບາຍເຖິງການຊອກຄົ້ນຫາ ແລະລັກສະນະຜົນຂອງຜະລິດຕະພັນໃນ HA hydrogel ເຊື່ອມຕໍ່ຂັ້ນສຸດທ້າຍທີ່ຜະລິດໂດຍປະຕິກິລິຍາຂອງ BDDE ແລະ HA ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນດ່າງ.HPLC ແລະການວິເຄາະມະຫາສານ chromatography ຂອງແຫຼວ (ການວິເຄາະ LC-MS).ເນື່ອງຈາກຄວາມເປັນພິດຂອງຜະລິດຕະພັນນີ້ຂອງ BDDE ແມ່ນບໍ່ຮູ້ຈັກ, ພວກເຮົາແນະນໍາວ່າປະລິມານການຕົກຄ້າງຂອງມັນຄວນຈະຖືກກໍານົດໃນລັກສະນະທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບວິທີການທີ່ປົກກະຕິແລ້ວ BDDE ໃນຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍ.
ເກືອໂຊດຽມທີ່ໄດ້ຮັບຂອງ HA (Shiseido Co., Ltd., ໂຕກຽວ, ປະເທດຍີ່ປຸ່ນ) ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນຂອງ ~ 1,368,000 Da (ວິທີການ Laurent) 18 ແລະຄວາມຫນືດພາຍໃນຂອງ 2.20 m3 / kg.ສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ crosslinking, BDDE (≥95%) ແມ່ນຊື້ຈາກ Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).ຟອສເຟດ buffered saline ກັບ pH 7.4 ໄດ້ຊື້ຈາກບໍລິສັດ Sigma-Aldrich.ສານລະລາຍທັງໝົດ, acetonitrile ແລະນໍ້າທີ່ໃຊ້ໃນການວິເຄາະ LC-MS ແມ່ນຊື້ຈາກຄຸນນະພາບເກຣດ HPLC.ອາຊິດ Formic (98%) ແມ່ນຊື້ເປັນປະເພດ reagent.
ການທົດລອງທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ໃນລະບົບ UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) ແລະເຊື່ອມຕໍ່ກັບ API 3000 triple quadrupole mass spectrometer ທີ່ຕິດຕັ້ງດ້ວຍແຫຼ່ງ electrospray ionization (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
ການສັງເຄາະຂອງ hydrogels HA ທີ່ເຊື່ອມໂຍງຂ້າມແມ່ນໄດ້ເລີ່ມຕົ້ນໂດຍການເພີ່ມ 198 mg ຂອງ BDDE ເຂົ້າໄປໃນການແກ້ໄຂ 10% (w/w) sodium hyaluronate (NaHA) ໃນທີ່ປະທັບຂອງ 1% alkali (sodium hydroxide, NaOH).ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ BDDE ສຸດທ້າຍໃນປະສົມປະຕິກິລິຍາແມ່ນ 9.9 mg/mL (0.049 mM).ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ປະສົມປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກປະສົມຢ່າງລະອຽດແລະເປັນເນື້ອດຽວກັນແລະອະນຸຍາດໃຫ້ດໍາເນີນການຢູ່ທີ່ 45 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 4 ຊົ່ວໂມງ.19 pH ຂອງຕິກິຣິຍາແມ່ນຮັກສາໄວ້ທີ່ ~12.
ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ປະສົມປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍນ້ໍາ, ແລະ hydrogel HA-BDDE ສຸດທ້າຍໄດ້ຖືກກັ່ນຕອງແລະເຈືອຈາງດ້ວຍ PBS buffer ເພື່ອບັນລຸຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ HA ຂອງ 10 ຫາ 25 mg / mL, ແລະ pH ສຸດທ້າຍຂອງ 7.4.ເພື່ອຂ້າເຊື້ອ hydrogels HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມທີ່ຜະລິດໄດ້, hydrogels ທັງຫມົດເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນ autoclaved (120 ° C ສໍາລັບ 20 ນາທີ).ໄຮໂດເຈນ BDDE-HA ທີ່ບໍລິສຸດຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ 4 ° C ຈົນກ່ວາການວິເຄາະ.
ເພື່ອວິເຄາະ BDDE ທີ່ມີຢູ່ໃນຜະລິດຕະພັນ HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັນຂ້າມ, ຕົວຢ່າງ 240 ມລກ ໄດ້ຖືກຊັ່ງນໍ້າໜັກ ແລະນໍາເຂົ້າໄປໃນຂຸມກາງ (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; ປະລິມານ 0.5 mL) ແລະ centrifuged ຢູ່ 10,000 rpm ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ. 10 ນາທີ.ທັງໝົດ 20 µL ຂອງທາດແຫຼວທີ່ດຶງລົງໄດ້ຖືກເກັບກຳ ແລະ ວິເຄາະ.
ເພື່ອວິເຄາະມາດຕະຖານ BDDE (Sigma-Aldrich Co) ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນດ່າງ (1%, 0.1% ແລະ 0.01% NaOH), ຖ້າເງື່ອນໄຂຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນບັນລຸໄດ້, ຕົວຢ່າງຂອງແຫຼວແມ່ນ 1: 10, 1: 100, ຫຼືສູງເຖິງ 1: 1,000,000 ຖ້າຈໍາເປັນ, ໃຊ້ MilliQ deionized water ສໍາລັບການວິເຄາະ.
ສໍາລັບວັດສະດຸເລີ່ມຕົ້ນທີ່ໃຊ້ໃນປະຕິກິລິຍາການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມ (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ແລະ 0.049 mM BDDE), 1 mL ຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງທີ່ກະກຽມຈາກວັດສະດຸເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂການວິເຄາະດຽວກັນ.
ເພື່ອກໍານົດຄວາມສະເພາະຂອງຈຸດສູງສຸດທີ່ປາກົດຢູ່ໃນແຜນທີ່ ion, 10 µL ຂອງ 100 ppb ການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ BDDE (Sigma-Aldrich Co) ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນຕົວຢ່າງ 20 µL.ໃນກໍລະນີນີ້, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງມາດຕະຖານໃນແຕ່ລະຕົວຢ່າງແມ່ນ 37 ppb.
ທໍາອິດ, ກະກຽມການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບ BDDE ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 11,000 mg/L (11,000 ppm) ໂດຍການເຈືອຈາງ 10 μL ຂອງມາດຕະຖານ BDDE (Sigma-Aldrich Co) ດ້ວຍນ້ໍາ 990 μL MilliQ (ຄວາມຫນາແຫນ້ນ 1.1 g / mL).ໃຊ້ການແກ້ໄຂນີ້ເພື່ອກະກຽມການແກ້ໄຂ BDDE 110 µg/L (110 ppb) ເປັນການເຈືອຈາງມາດຕະຖານລະດັບປານກາງ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ໃຫ້ໃຊ້ສານເຈືອຈາງມາດຕະຖານ BDDE ລະດັບປານກາງ (110 ppb) ເພື່ອກະກຽມເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານໂດຍການເຈືອຈາງລະດັບປານກາງ diluent ຫຼາຍຄັ້ງເພື່ອບັນລຸຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ຕ້ອງການຂອງ 75, 50, 25, 10, ແລະ 1 ppb.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1, ມັນພົບວ່າເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ BDDE ຈາກ 1.1 ຫາ 110 ppb ມີເສັ້ນເສັ້ນທີ່ດີ (R2> 0.99).ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານໄດ້ຖືກຊ້ໍາໃນສີ່ການທົດລອງເອກະລາດ.
ຮູບທີ່ 1 ເສັ້ນໂຄ້ງການປັບມາດຕະຖານ BDDE ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການວິເຄາະ LC-MS, ເຊິ່ງມີການພົວພັນກັນທີ່ດີ (R2>0.99).
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ.
ເພື່ອກໍານົດແລະປະລິມານມາດຕະຖານ BDDE ທີ່ມີຢູ່ໃນ HA ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມແລະມາດຕະຖານ BDDE ໃນການແກ້ໄຂພື້ນຖານ, ການວິເຄາະ LC-MS ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້.
ການແຍກ chromatographic ແມ່ນບັນລຸໄດ້ໃນຖັນ LUNA 2.5 µm C18(2)-HST (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (25 ° C) ໃນລະຫວ່າງການວິເຄາະ.ໄລຍະມືຖືປະກອບດ້ວຍ acetonitrile (ຕົວລະລາຍ A) ແລະນ້ໍາ (ຕົວລະລາຍ B) ປະກອບດ້ວຍອາຊິດ formic 0.1%.ໄລຍະໂທລະສັບມືຖືແມ່ນ eluted ໂດຍ gradient elution.gradient ມີດັ່ງນີ້: 0 ນາທີ, 2% A;1 ນາທີ, 2% A;6 ນາທີ, 98% A;7 ນາທີ, 98% A;7.1 ນາທີ, 2% A;10 ນາທີ , 2% A. ເວລາແລ່ນແມ່ນ 10 ນາທີ ແລະ ປະລິມານສີດແມ່ນ 20 µL.ເວລາເກັບຮັກສາ BDDE ແມ່ນປະມານ 3.48 ນາທີ (ຕັ້ງແຕ່ 3.43 ຫາ 4.14 ນາທີໂດຍອີງໃສ່ການທົດລອງ).ໄລຍະມືຖືໄດ້ຖືກສູບໃນອັດຕາການໄຫຼຂອງ 0.25 mL / ນາທີສໍາລັບການວິເຄາະ LC-MS.
ສໍາລັບການວິເຄາະ BDDE ແລະປະລິມານໂດຍ MS, ລະບົບ UPLC (ນ້ໍາ) ໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັບ API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) ທີ່ມີແຫຼ່ງ electrospray ionization, ແລະການວິເຄາະແມ່ນດໍາເນີນໃນຮູບແບບ ion ບວກ (ESI+).
ອີງຕາມການວິເຄາະ fragment ion ທີ່ດໍາເນີນຢູ່ໃນ BDDE, fragment ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງສຸດແມ່ນຖືກກໍານົດວ່າເປັນຊິ້ນສ່ວນທີ່ສອດຄ່ອງກັບ 129.1 Da (ຮູບ 6).ດັ່ງນັ້ນ, ໃນໂຫມດການຕິດຕາມຫຼາຍໄອອອນ (MIM) ສໍາລັບປະລິມານ, ການແປງມະຫາຊົນ (ອັດຕາສ່ວນມະຫາຊົນຕໍ່ກັບການສາກໄຟ [m/z]) ຂອງ BDDE ແມ່ນ 203.3/129.1 Da.ມັນຍັງໃຊ້ໂຫມດການສະແກນເຕັມ (FS) ແລະໂຫມດການສະແກນຜະລິດຕະພັນ (PIS) ສໍາລັບການວິເຄາະ LC-MS.
ເພື່ອກວດສອບຄວາມສະເພາະຂອງວິທີການ, ຕົວຢ່າງເປົ່າ (ໄລຍະມືຖືເບື້ອງຕົ້ນ) ຖືກວິເຄາະ.ບໍ່ມີສັນຍານຖືກກວດພົບຢູ່ໃນຕົວຢ່າງເປົ່າທີ່ມີການແປງມະຫາຊົນຂອງ 203.3/129.1 Da.ກ່ຽວກັບການເຮັດເລື້ມຄືນຂອງການທົດລອງ, ການສັກຢາມາດຕະຖານ 10 ຂອງ 55 ppb (ຢູ່ເຄິ່ງກາງຂອງເສັ້ນໂຄ້ງ calibration) ໄດ້ຖືກວິເຄາະ, ເຮັດໃຫ້ມີການບິດເບືອນມາດຕະຖານທີ່ເຫຼືອ (RSD) <5% (ຂໍ້ມູນບໍ່ໄດ້ສະແດງ).
ເນື້ອໃນ BDDE ທີ່ເຫຼືອໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໃນແປດ BDDE autoclaved ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ HA hydrogels ຂ້າມເຊື່ອມຕໍ່, ທີ່ສອດຄ້ອງກັນກັບສີ່ການທົດລອງເອກະລາດ.ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນພາກ "ວັດສະດຸແລະວິທີການ", ປະລິມານໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍຄ່າສະເລ່ຍຂອງເສັ້ນໂຄ້ງການຖົດຖອຍຂອງການເຈືອຈາງມາດຕະຖານ BDDE, ເຊິ່ງກົງກັບຈຸດສູງສຸດທີ່ເປັນເອກະລັກທີ່ກວດພົບຢູ່ທີ່ BDDE ມະຫາຊົນຂອງ 203.3/129.1 Da, ດ້ວຍການເກັບຮັກສາໄວ້. ເວລາ 3.43 ຫາ 4.14 ນາທີ ບໍ່ລໍຖ້າ.ຮູບທີ 2 ສະແດງຕົວຢ່າງ chromatogram ຂອງມາດຕະຖານການອ້າງອີງ 10 ppb BDDE.ຕາຕະລາງ 1 ສະຫຼຸບເນື້ອໃນ BDDE ທີ່ເຫຼືອຂອງແປດ hydrogels ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຊ່ວງຄ່າແມ່ນ 1 ຫາ 2.46 ppb.ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ BDDE ທີ່ເຫຼືອຢູ່ໃນຕົວຢ່າງແມ່ນຍອມຮັບໄດ້ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ຂອງມະນຸດ (<2 ppm).
ຮູບ 2 Ion chromatogram ຂອງ 10 ppb ມາດຕະຖານການອ້າງອິງ BDDE (Sigma-Aldrich Co), ການຫັນປ່ຽນ MS (m/z) ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການວິເຄາະ LC-MS ຂອງ 203.30/129.10 Da (ໃນຮູບແບບ MRM ໃນທາງບວກ).
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ;MS, ມະຫາຊົນ;m/z, ອັດຕາສ່ວນມະຫາຊົນຕໍ່ການສາກໄຟ.
ຫມາຍເຫດ: ຕົວຢ່າງ 1-8 ແມ່ນ autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels.ປະລິມານທີ່ເຫຼືອຂອງ BDDE ໃນ hydrogel ແລະຈຸດສູງສຸດຂອງເວລາເກັບຮັກສາ BDDE ແມ່ນຍັງຖືກລາຍງານ.ສຸດທ້າຍ, ການມີຢູ່ຂອງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ທີ່ມີເວລາເກັບຮັກສາທີ່ແຕກຕ່າງກັນກໍ່ຖືກລາຍງານ.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, ອາຊິດ hyaluronic;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ;tR, ເວລາເກັບຮັກສາ;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;RRT, ເວລາເກັບຮັກສາພີ່ນ້ອງ.
ເປັນເລື່ອງແປກທີ່, ການວິເຄາະຂອງ LC-MS ion chromatogram ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າໂດຍອີງໃສ່ທຸກຕົວຢ່າງ HA hydrogel ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມ autoclaved ທີ່ຖືກວິເຄາະ, ມີຈຸດສູງສຸດພິເສດໃນເວລາເກັບຮັກສາສັ້ນກວ່າ 2.73 ຫາ 3.29 ນາທີ.ຕົວຢ່າງ, ຮູບທີ 3 ສະແດງໃຫ້ເຫັນ ion chromatogram ຂອງຕົວຢ່າງ HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັນ, ບ່ອນທີ່ຈຸດສູງສຸດເພີ່ມເຕີມປະກົດຂຶ້ນໃນເວລາເກັບຮັກສາທີ່ແຕກຕ່າງກັນປະມານ 2.71 ນາທີ.ໄລຍະເວລາເກັບຮັກສາທີ່ສັງເກດເຫັນ (RRT) ລະຫວ່າງຈຸດສູງສຸດທີ່ສັງເກດເຫັນໃຫມ່ແລະຈຸດສູງສຸດຈາກ BDDE ພົບວ່າເປັນ 0.79 (ຕາຕະລາງ 1).ເນື່ອງຈາກພວກເຮົາຮູ້ວ່າຈຸດສູງສຸດທີ່ສັງເກດເຫັນໃຫມ່ແມ່ນເກັບຮັກສາໄວ້ຫນ້ອຍລົງໃນຄໍລໍາ C18 ທີ່ໃຊ້ໃນການວິເຄາະ LC-MS, ສູງສຸດໃຫມ່ອາດຈະກົງກັບສານປະສົມຂົ້ວໂລກຫຼາຍກ່ວາ BDDE.
ຮູບທີ 3 Ion chromatogram ຂອງຕົວຢ່າງ HA hydrogel ຂ້າມເຊື່ອມຕໍ່ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍ LC-MS (MRM ການແປງມະຫາຊົນ 203.3/129.0 Da).
ຕົວຫຍໍ້: HA, ອາຊິດ hyaluronic;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ;RRT, ເວລາເກັບຮັກສາພີ່ນ້ອງ;tR, ເວລາເກັບຮັກສາ.
ເພື່ອປະຕິເສດຄວາມເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ທີ່ສັງເກດເຫັນອາດຈະເປັນສິ່ງປົນເປື້ອນໃນເບື້ອງຕົ້ນໃນວັດຖຸດິບທີ່ໃຊ້, ວັດຖຸດິບເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ວິທີການວິເຄາະ LC-MS ດຽວກັນ.ວັດສະດຸເລີ່ມຕົ້ນທີ່ວິເຄາະປະກອບມີນ້ໍາ, 2% NaHA ໃນນ້ໍາ, 1% NaOH ໃນນ້ໍາ, ແລະ BDDE ຢູ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນດຽວກັນທີ່ໃຊ້ໃນປະຕິກິລິຍາຂ້າມເຊື່ອມຕໍ່.chromatogram ion ຂອງວັດສະດຸເລີ່ມຕົ້ນທີ່ໃຊ້ບໍ່ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປະສົມຫຼືຈຸດສູງສຸດ, ແລະເວລາເກັບຮັກສາຂອງມັນກົງກັບຈຸດສູງສຸດທີ່ສັງເກດເຫັນ.ຄວາມຈິງນີ້ຍົກເລີກຄວາມຄິດທີ່ວ່າບໍ່ພຽງແຕ່ອຸປະກອນການເລີ່ມຕົ້ນອາດມີທາດປະສົມຫຼືສານທີ່ອາດຈະແຊກແຊງຂັ້ນຕອນການວິເຄາະ, ແຕ່ບໍ່ມີສັນຍານຂອງການປົນເປື້ອນທີ່ເປັນໄປໄດ້ກັບຜະລິດຕະພັນຫ້ອງທົດລອງອື່ນໆ.ຄ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ໄດ້ຮັບຫຼັງຈາກການວິເຄາະ LC-MS ຂອງ BDDE ແລະຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 2 (ຕົວຢ່າງ 1-4) ແລະ chromatogram ion ໃນຮູບ 4.
ໝາຍເຫດ: ຕົວຢ່າງ 1-4 ກົງກັບວັດຖຸດິບທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດ BDDE autoclaved cross-linked HA hydrogels.ຕົວຢ່າງເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ໄດ້ຖືກ autoclaved.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, ອາຊິດ hyaluronic;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ.
ຮູບທີ 4 ກົງກັບ LC-MS chromatogram ຂອງຕົວຢ່າງຂອງວັດຖຸດິບທີ່ໃຊ້ໃນປະຕິກິລິຍາເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມຂອງ HA ແລະ BDDE.
ຫມາຍເຫດ: ທັງຫມົດເຫຼົ່ານີ້ຖືກວັດແທກຢູ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນແລະອັດຕາສ່ວນດຽວກັນທີ່ໃຊ້ເພື່ອປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມ.ຕົວເລກສໍາລັບວັດຖຸດິບທີ່ວິເຄາະໂດຍ chromatogram ກົງກັບ: (1) ນ້ໍາ, (2) 2% HA aqueous solution, (3) 1% NaOH aqueous solution.ການວິເຄາະ LC-MS ແມ່ນປະຕິບັດສໍາລັບການປ່ຽນມະຫາຊົນຂອງ 203.30 / 129.10 Da (ໃນຮູບແບບ MRM ໃນທາງບວກ).
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, ອາຊິດ hyaluronic;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ.
ເງື່ອນໄຂທີ່ນໍາໄປສູ່ການສ້າງຕັ້ງຂອງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ໄດ້ຖືກສຶກສາ.ເພື່ອສຶກສາວິທີການປະຕິກິລິຢາທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດ hydrogel HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມຜົນກະທົບຕໍ່ປະຕິກິລິຍາຂອງຕົວແທນການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມ BDDE, ນໍາໄປສູ່ການສ້າງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ (ຜະລິດຕະພັນທີ່ເປັນໄປໄດ້), ການວັດແທກທີ່ແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກປະຕິບັດ.ໃນການກໍານົດເຫຼົ່ານີ້, ພວກເຮົາໄດ້ສຶກສາແລະວິເຄາະ BDDE crosslinker ສຸດທ້າຍ, ເຊິ່ງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ NaOH (0%, 1%, 0.1%, ແລະ 0.01%) ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ມີນ້ໍາ, ປະຕິບັດຕາມຫຼືບໍ່ມີ autoclaving.ຂັ້ນຕອນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍເພື່ອຈໍາລອງເງື່ອນໄຂດຽວກັນແມ່ນຄືກັນກັບວິທີການທີ່ໃຊ້ໃນການຜະລິດ hydrogel HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມ.ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນພາກ "ວັດສະດຸແລະວິທີການ", ການຫັນປ່ຽນມະຫາຊົນຂອງຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ LC-MS ກັບ 203.30/129.10 Da.BDDE ແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ແມ່ນໄດ້ຖືກຄິດໄລ່, ແລະຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 3. ບໍ່ມີຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ໄດ້ຖືກກວດພົບໃນຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ໄດ້ຖືກ autoclaved, ໂດຍບໍ່ຄໍານຶງເຖິງການມີ NaOH ໃນການແກ້ໄຂ (ຕົວຢ່າງ 1-4, ຕາຕະລາງ. 3).ສໍາລັບຕົວຢ່າງ autoclaved, ສູງສຸດໃຫມ່ຖືກກວດພົບພຽງແຕ່ຢູ່ໃນທີ່ປະທັບຂອງ NaOH ໃນການແກ້ໄຂ, ແລະການສ້າງຕັ້ງຂອງຈຸດສູງສຸດເບິ່ງຄືວ່າຈະຂຶ້ນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ NaOH ໃນການແກ້ໄຂ (ຕົວຢ່າງ 5-8, ຕາຕະລາງ 3) (RRT = 0.79).ຮູບທີ 5 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຕົວຢ່າງຂອງ ion chromatogram, ສະແດງໃຫ້ເຫັນສອງຕົວຢ່າງ autoclaved ໃນປະກົດຕົວຫຼືບໍ່ມີ NAOH.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ.
ຫມາຍເຫດ: ໂຄຣມາໂຕແກຣມເທິງສຸດ: ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍການແກ້ໄຂນ້ໍາ 0.1% NaOH ແລະ autoclaved (120 ° C ສໍາລັບ 20 ນາທີ).ໂຄຣມາໂຕແກຣມລຸ່ມ: ຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍ NaOH, ແຕ່ຖືກເຮັດດ້ວຍ autoclaved ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂດຽວກັນ.ການແປງມະຫາຊົນຂອງ 203.30 / 129.10 Da (ໃນຮູບແບບ MRM ໃນທາງບວກ) ຖືກວິເຄາະໂດຍ LC-MS.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ.
ໃນຕົວຢ່າງ autoclaved ທັງຫມົດ, ມີຫຼືບໍ່ມີ NaOH, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ BDDE ໄດ້ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ເຖິງ 16.6 ເທົ່າ) (ຕົວຢ່າງ 5-8, ຕາຕະລາງ 2).ການຫຼຸດລົງຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ BDDE ອາດຈະເປັນຍ້ອນຄວາມຈິງທີ່ວ່າໃນອຸນຫະພູມສູງ, ນ້ໍາສາມາດເຮັດຫນ້າທີ່ເປັນພື້ນຖານ (nucleophile) ເພື່ອເປີດວົງແຫວນ epoxide ຂອງ BDDE ເພື່ອສ້າງເປັນສານປະກອບ 1,2-diol.ຄຸນນະພາບ monoisotopic ຂອງສານປະສົມນີ້ແມ່ນແຕກຕ່າງຈາກ BDDE ແລະດັ່ງນັ້ນຈະບໍ່ໄດ້ຮັບຜົນກະທົບ.LC-MS ກວດພົບການປ່ຽນແປງມະຫາຊົນຂອງ 203.30/129.10 Da.
ສຸດທ້າຍ, ການທົດລອງເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຜະລິດຂອງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ແມ່ນຂຶ້ນກັບການມີ BDDE, NAOH, ແລະຂະບວນການ autoclaving, ແຕ່ບໍ່ມີຫຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບ HA.
ສູງສຸດໃຫມ່ທີ່ພົບເຫັນໃນເວລາທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ປະມານ 2.71 ນາທີຫຼັງຈາກນັ້ນມີລັກສະນະໂດຍ LC-MS.ສໍາລັບຈຸດປະສົງນີ້, BDDE (9.9 mg/mL) ໄດ້ຖືກອົບໃນການແກ້ໄຂນ້ໍາ 1% NaOH ແລະ autoclaved.ໃນຕາຕະລາງ 4, ຄຸນລັກສະນະຂອງຈຸດສູງສຸດໃຫມ່ແມ່ນປຽບທຽບກັບຈຸດສູງສຸດທີ່ຮູ້ຈັກ BDDE (ເວລາເກັບຮັກສາປະມານ 3.47 ນາທີ).ອີງຕາມການວິເຄາະການແຕກແຍກ ion ຂອງສອງຈຸດສູງສຸດ, ມັນສາມາດສະຫຼຸບໄດ້ວ່າຈຸດສູງສຸດທີ່ມີເວລາເກັບຮັກສາ 2.72 ນາທີສະແດງໃຫ້ເຫັນຊິ້ນດຽວກັນກັບຈຸດສູງສຸດຂອງ BDDE, ແຕ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (ຮູບ 6).ສໍາລັບຈຸດສູງສຸດທີ່ສອດຄ້ອງກັບເວລາເກັບຮັກສາ (PIS) ຂອງ 2.72 ນາທີ, ສູງສຸດທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຫຼັງຈາກ fragmentation ໃນມະຫາຊົນຂອງ 147 Da.ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ BDDE (9.9 mg/mL) ທີ່ໃຊ້ໃນການກໍານົດນີ້, ຮູບແບບການດູດຊຶມທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (UV, λ = 200 nm) ໃນສະເປກ ultraviolet ຍັງໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຫຼັງຈາກການແຍກ chromatographic (ຮູບ 7).ຈຸດສູງສຸດທີ່ມີເວລາເກັບຮັກສາ 2.71 ນາທີແມ່ນຍັງສັງເກດເຫັນຢູ່ທີ່ 200 nm, ໃນຂະນະທີ່ຈຸດສູງສຸດ BDDE ບໍ່ສາມາດສັງເກດເຫັນໃນ chromatogram ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂດຽວກັນ.
ຕາຕະລາງ 4 ລັກສະນະຜົນຂອງຈຸດສູງສຸດໃໝ່ທີ່ມີເວລາຮັກສາໄວ້ປະມານ 2.71 ນາທີ ແລະຈຸດສູງສຸດ BDDE ທີ່ມີເວລາຮັກສາໄວ້ 3.47 ນາທີ.
ຫມາຍເຫດ: ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຜົນເຫຼົ່ານີ້, ການວິເຄາະ LC-MS ແລະ HPLC (MRM ແລະ PIS) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ໃນສອງຈຸດສູງສຸດ.ສໍາລັບການວິເຄາະ HPLC, ການກວດຫາ UV ທີ່ມີຄວາມຍາວຄື່ນ 200 nm ແມ່ນໃຊ້.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, chromatography ແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ;m/z, ອັດຕາສ່ວນມະຫາຊົນຕໍ່ກັບການສາກໄຟ;PIS, ການສະແກນ Ion ຜະລິດຕະພັນ;ແສງ ultraviolet, ແສງ ultraviolet.
ຫມາຍເຫດ: ຊິ້ນສ່ວນມະຫາຊົນແມ່ນໄດ້ຮັບໂດຍການວິເຄາະ LC-MS (PIS).chromatogram ເທິງ: ລະດັບມະຫາຊົນຂອງຊິ້ນສ່ວນຕົວຢ່າງມາດຕະຖານ BDDE.ໂຄຣມາໂຕແກຣມລຸ່ມ: ຂອບເຂດມະຫາຊົນຂອງຈຸດສູງສຸດໃໝ່ທີ່ກວດພົບ (RRT ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຈຸດສູງສຸດ BDDE ແມ່ນ 0.79).BDDE ໄດ້ຖືກປຸງແຕ່ງໃນການແກ້ໄຂ 1% NaOH ແລະ autoclaved.
ຕົວຫຍໍ້: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography ແຫຼວ ແລະ spectrometry ມະຫາຊົນ;MRM, ການຕິດຕາມຕິກິຣິຍາຫຼາຍ;PIS, scan ion ຜະລິດຕະພັນ;RRT, ເວລາເກັບຮັກສາພີ່ນ້ອງ.
ຮູບທີ່ 7 ໄອອອນ chromatogram ຂອງ 203.30 Da precursor ion, ແລະ (A) ສູງສຸດໃຫມ່ທີ່ມີເວລາເກັບຮັກສາຂອງ 2.71 ນາທີແລະ (B) ການກວດສອບ UV ຂອງມາດຕະຖານອ້າງອິງ BDDE ສູງສຸດ 3.46 ນາທີຢູ່ທີ່ 200 nm.
ໃນທຸກໆ hydrogels HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມທີ່ຜະລິດ, ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ BDDE ທີ່ຕົກຄ້າງຫຼັງຈາກປະລິມານ LC-MS ແມ່ນ <2 ppm, ແຕ່ຈຸດສູງສຸດທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກໃຫມ່ໄດ້ປາກົດຢູ່ໃນການວິເຄາະ.ສູງສຸດໃຫມ່ນີ້ບໍ່ກົງກັບຜະລິດຕະພັນມາດຕະຖານ BDDE.ຜະລິດຕະພັນມາດຕະຖານ BDDE ໄດ້ຜ່ານການວິເຄາະຄຸນນະພາບດຽວກັນ (MRM conversion 203.30/129.10 Da) ໃນໂຫມດ MRM ໃນທາງບວກ.ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ວິທີການວິເຄາະອື່ນໆເຊັ່ນ: chromatography ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການທົດສອບຈໍາກັດເພື່ອກວດຫາ BDDE ໃນ hydrogels, ແຕ່ຂອບເຂດຈໍາກັດການກວດສອບສູງສຸດ (LOD) ແມ່ນຕ່ໍາກວ່າ 2 ppm ເລັກນ້ອຍ.ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ມາຮອດປັດຈຸບັນ, NMR ແລະ MS ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດລະດັບການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມແລະ / ຫຼືການດັດແກ້ຂອງ HA ໃນຊິ້ນສ່ວນຫນ່ວຍນ້ໍາຕານຂອງຜະລິດຕະພັນ HA ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັນ.ຈຸດປະສົງຂອງເຕັກນິກເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ເຄີຍມີການກວດສອບ BDDE ທີ່ຕົກຄ້າງຢູ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕໍ່າດັ່ງທີ່ພວກເຮົາອະທິບາຍໃນບົດຄວາມນີ້ (LOD ຂອງວິທີການ LC-MS ຂອງພວກເຮົາ = 10 ppb).
ເວລາປະກາດ: ກັນຍາ-01-2021